PCR

El PCR «Reacción en cadena de la polimerasa» permite la amplificación de un pequeño fragmento de ADN. Gracias a esta técnica se han podido realizar estudios genéticos en diversos campos de la ciencia. Por ejemplo, se utiliza en cáncer para determinar la presencia de marcadores específicos del desarrollo de está enfermedad. También se emplea en infectología permitiendo no solo detectar el agente causal (ej. El virus del papiloma humano), sino además evaluar su comportamiento en el tiempo (ej. evolución de la carga viral en una infección).

APLICACIONES DE PCR

  • Identificar genes asociados con enfermedades de transmisión genética
  • Identificar mutaciones, como re-arreglos, deleciones y dosis genética en caso de portadores
  • Detectar polimorfismos en los fragmentos de restricción de diversos genes
  • Análisis de recombinantes y eventos infrecuentes en el ADN
  • Mutagénesis in vitro
  • Detectar expresión de un gen, semicuantitativo, (RT-PCR)
  • Real Time, PCR cuantiativa, (RT-PCR)

PCR EN TIEMPO REAL

Es una RT-PCR en la cual no se detecta cuanto cDNA se acumula al final, sino que se va midiendo de continuo para determinar en que ciclo de la PCR se alcanza un valor umbral. Cuanto antes se alcance (número de ciclos más bajo) mayor será la concentración inicial del ARNm. Por comparación con un control (gen de expresión constitutiva) pueden determinarse las diferencias de expresión de un gen en diferentes tejidos, condiciones, poblaciones, etc